中文字幕无码日韩专区免费,国产午夜精品无码,少妇沦陷精油按摩中文字幕 ,亚洲中文久久精品无码

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 傷口愈合/細胞劃痕實驗新方法-如何劃出筆直均一的劃痕

傷口愈合/細胞劃痕實驗新方法-如何劃出筆直均一的劃痕

更新時間:2016-03-31   更新時間:2016-03-31   點擊次數(shù):6710次

前言

     傷口愈合實驗是體外研究細胞遷移的一個有用的實驗。原理是人為的在鋪板的單層細胞中制造一個空白的無細胞的地帶,然后對這個無細胞地帶的邊緣的細胞進行觀察;這些邊緣的細胞會開始進行遷移活動,并且終覆蓋整個無細胞的區(qū)域,重新互相接觸在一起。

傳統(tǒng)實驗方法

     細胞在培養(yǎng)皿內(nèi)貼壁后,使用移液槍的槍頭在貼壁細胞的中間劃過,人為造成一道傷口(劃痕),之后定時測量劃痕的寬度,進而得到傷口愈合的細胞遷移數(shù)據(jù)。

實驗缺點:

1.手動劃痕,不能保證每次劃痕的一致;

2.有時候在劃細胞的同時會刮壞一片細胞對劃痕的邊緣的細胞造成機械損傷;

3.如果培養(yǎng)皿底部還有包被蛋白的話,槍頭劃過,很可能傷害到包被,進而影響到細胞遷移,結(jié)果便很難判斷是哪個因素造成了決定性的影響。

4.定時測量劃痕的寬度,計算劃痕寬度隨時間推移的變化;在選取劃痕測量點時,不可避免地引入了主觀誤差(人為選取了遷移結(jié)果符合實驗預(yù)期的點);

  綜上,傳統(tǒng)的傷口愈合方法總是重復(fù)性不佳,對于實驗結(jié)果的闡述說服力不足。

       下面分享一種新方法,輕松得到筆直均一的劃痕!

實驗核心

       使用傷口愈合插件制造筆直均一的劃痕(圖一)。

實驗方法     

  1. 實驗材料
  • 細胞:     MCF-7 (ATCC: HTB-22; DSMZ: ACC115)
  • 實驗耗材:   ibidi 35 mm培養(yǎng)皿帶傷口愈合插件(ibidi, 81176) ibiTreat
  • 細胞培養(yǎng)基:  RPMI (Sigma, R8758) + 10% FCS (Sigma, F0804)
  • 細胞消化試劑:  Trypsin-ETDA (Sigma, 59418C)
  • 滅菌鑷子
  • 倒置顯微鏡,如果需要進行連續(xù)的觀測好搭配鏡載加熱孵育系統(tǒng)

 

  1. 實驗步驟
  1. 鋪細胞(圖

為了獲得更好的實驗結(jié)果,在做實驗之前好進行一次預(yù)實驗,以確定需要使用的細胞懸液的密度。我們建議,好將細胞懸液密度調(diào)整為24小時后正好可以長滿每個插件的小孔。

  • ibidi傷口愈合培養(yǎng)皿底部的保護膠帶撕除。
  • 準備細胞懸液,調(diào)整懸液濃度為3*10cells/ml,這樣24小時后,細胞能剛剛長滿單個小孔。
  • ibidi細胞插件的每孔中加入70μl的細胞懸液。注意不要大力晃動培養(yǎng)皿。以防止細胞不均勻。
  • 37C培養(yǎng)箱中孵育24小時。

 

 

A. 去除培養(yǎng)皿底部的保護膠帶。B.C.ibidi傷口愈合插件中加入細胞。

 

  1. 形成劃痕

當所有細胞都貼壁并且剛剛長滿的時候,就可以開始傷口愈合實驗了。用鑷子將傷口愈合插件提出,之后加入新鮮的培養(yǎng)基,或者在培養(yǎng)基中加入刺激劑,然后觀察傷口愈合的情況。

  • 24小時后對細胞前一天種的細胞做鏡檢。細胞要貼壁并且是剛剛長滿每個孔。長得過多移除插件時會帶走很多細胞,長得過少,傷口愈合的效果很差。
  • 如圖所示,小心的用鑷子夾住插件的一個角,將插件移除。 

           

圖三:用鑷子移除插件

  • 移除插件后,要用顯微鏡檢查是否形成合格的劃痕(圖)。
  • 小心的清洗細胞,之后加入2ml培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

 

圖四 筆直均一的劃痕

 

  1. 采集并分析圖像

一般傷口愈合實驗都是采集一張劃痕的初始圖像,再在實驗結(jié)束時候采集一張劃痕愈合的圖像。我們建議可以在這個過程多做幾個時間點,這樣可以觀測到細胞遷移隨時間的變化特征。

  • 在顯微鏡下選取能同時看到劃痕和兩邊細胞的視野進行成像,劃痕的方向好在視野內(nèi)為水平或者垂直
  • MCF-7細胞每半小時采集一張圖片,一直持續(xù)到20小時。
  • 采用ibidi傷口愈合分析軟件,統(tǒng)計細胞的覆蓋面積,做出曲線圖,可以看到在大約11個小時的時候,細胞基本就已經(jīng)長滿了,接下來幾個小時細胞覆蓋面積都不會發(fā)生變化(圖)。

 

圖五(a)  顯微鏡下觀察細胞覆蓋面積的變化

 

圖五(b)  細胞覆蓋面積的數(shù)據(jù)統(tǒng)計

 

 

實驗總結(jié)對比

1.本實驗方法能得到重復(fù)性更好的劃痕(圖六);

圖六 通過計算劃痕的面積可以看出,在多次實驗中,槍頭劃痕(左圖)

制造的劃痕面積數(shù)據(jù)波動大,重復(fù)性差;ibidi傷口愈合插件(右圖)制造的劃痕面積數(shù)據(jù)統(tǒng)一,重復(fù)性良好

2.不會刮壞細胞,也不會造成劃痕的邊緣的細胞機械損傷;

3.不會傷害到培養(yǎng)皿底部包被蛋白

 

圖一:左圖表示槍頭劃過后,底部包被蛋白被劃傷,細胞遷移結(jié)果受到底部不均一的影響。右圖ibidi插件移除后底部的包被蛋白沒有被破壞。

 

4.通過計算細胞覆蓋面積得出細胞遷移結(jié)果,避免人為選取測量點,使數(shù)據(jù)更客觀。1天內(nèi)就能得到測量結(jié)果,實驗分析更快更準確。

聯(lián)


免费大片a一级久久国产| 日韩欧美国产黄片在线看| 中文字幕色一区二区三区| 给我免费播放片在线观看| 一本久久精品一区二区| 仙踪林果冻传媒一区二区| 国产精品国产三级国产av主播| 亚洲av无一区二区三区久久 | 国产关晓彤AV在线播放| 高清国产亚洲精品自91| 精品亚洲欧美一区二区在线| 色AV人人澡人人爽人人夜夜学生| 久久久精品国产真实原创| 老公晚上日不停我腿都酸了| 青娱乐精品免费精品在线| 国产高清在线精品一区小说| 樱花草在线观看播放视频| 日本一区二区在免费观看| 亚洲av情网站在线观看| 黄色视频无遮挡在线播放| 国产精品九九久久精品三级| 精品人妻少妇一区二区三级| 国产av最新精品自在自线| 国产性做爰片免费视频看| 日韩精品中文字幕女主播| 久久蜜臀av一区二区三区| 在线观看黑丝美女被乱c| 国产毛片精品一区二区色| 免费看av精品日韩av| 免费男人下部进女人下部视频| 在线午夜福利网| 国产免费内射又粗又爽密桃视频 | 亚洲av无码99久久久国精| 亚洲天堂网一区二区免费| 先锋影音av资源一区二区| 国产精品五月天强力打造| 亚洲小说图片区综合在线| 精品在线99国内精品女| 蜜桃臀无码内射一区二区三区| 精品第一国产综合精品aⅴ| 成 人 黄 色 电 影 网站|